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En el laboratorio, la espectrofotometría es una técnica de medición utilizada en el análisis cuantitativo y cualitativo. Esta técnica mide la variación de intensidad de un rango de longitud de onda de radiación electromagnética seleccionado arbitrariamente. Este instrumento de medición óptica permite una medición de alta precisión del cambio en la intensidad de la luz monocromática.

La espectrofotometría es ampliamente utilizada en todos los campos de las ciencias naturales, y es impensable tener un laboratorio sin al menos un espectrofotómetro, que fue inventado en 1940 por Arnold O. Beckman.

El espectrofotómetro es un instrumento de medición óptica que permite medir el cambio de intensidad de un solo color que pasa a través de una muestra desde el rango ultravioleta hasta el rango visible e infrarrojo.

Espectrofotometría

La fuente de luz se distingue según el rango de longitud de onda de la medición analítica utilizando un monocromador. El haz de luz ya monocromático ingresa al espacio de muestra del instrumento, donde pasa a través de una cubeta colocada en el camino de la luz. El sensor de luz mide la intensidad de la luz que sale de la cubeta y la convierte en una señal eléctrica, que puede ser de varias formas, como una fotocélula, un multiplicador de fotoelectrones o, en dispositivos más modernos, una célula de silicio.

En dispositivos de chorro único más baratos y simples, solo se puede colocar una cubeta a la vez. La solución de referencia utilizada suele ser el disolvente de la sustancia a medir o analizar. Esta solución se puede considerar como una solución en la que la concentración del soluto es cero.

El aparato debe ponerse a cero para esta solución de concentración, donde la absorción de luz es cero, su transmisión de luz es 100% y luego ingresa al camino de la luz.

Espectrofotometría

La espectrofotometría tiene alta precisión y velocidad de sensibilidad. Además, la difusión de los espectrofotómetros se ha visto favorecida por el hecho de que, manteniendo el diseño del instrumento y el principio de medición, es posible adaptar la unidad porta muestras o integrarla en una unidad de instrumento más grande.

El espectrofotómetro mide la absorción de luz de una solución colocada en una cubeta, pero las cubetas también deben ser capaces de estudiar reacciones químicas, es decir, procesos químicos que continúan en el tiempo. Tal reacción puede ser la medición de la actividad enzimática en bioquímica, diagnóstico de laboratorio clínico, en el que el sustrato enzimático se transforma en un llamado producto en la cubeta.

A finales del siglo XX, se inició la espectrofotometría como apoyo a las técnicas de PCR para medir el ADN o las proteínas. Finalmente, los laboratorios clínicos que estudian enfermedades cuentan con dispositivos con brazos robóticos automatizados, pipetas automáticas y centrífugas para el análisis de muestras de sangre y orina que pueden realizar pruebas químicas extremadamente complejas basadas en espectrofotometría.

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Información recopilada por Dezső Sándor.